La técnica de la tinción Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología que permite diferenciar rápida y fácilmente las bacterias según sus características morfológicas. El principio del método se basa en la tinción de todas las bacterias mediante cristal violeta o violeta de genciana y posteriormente decolorar los microorganismos con alcohol-acetona, decolorándose los microorganismos Gram- mientras que los Gram+ siguen manteniendo la coloración.

Posteriormente se utiliza un colorante de contraste para visualizar los microorganismos Gram- como la fucsina o safranina. De este modo podemos visualizar las bacterias Gram+ de color azul-violáceo mientras que las Gram- se visualizaran de color rojo o rosa.

Comparación de las envolturas celulares bacterianas

Bacteria Gram-positiva

Bacteria Gram-negativa

Membrana citoplasmática (1),Peptidoglicano (2), Fosfolípidos (3), Proteínas (4), Ácido lipoteicoico (5), Espacio periplasmático (6), Membrana externa (7), Lipoproteína (8), Lipopolisacáridos (9), Porinas (10)

Esta técnica de tinción es casi exclusiva de las bacterias y los hongos, siendo estos irregulares en la tinción, mientras que en vegetales y animales no permanece la tinción.

Los fundamentos de la diferenciación entre ambos grupos se basan exclusivamente en las características diferentes de la pared celulares entre ambos grupos de bacterias. La clave es el peptidoglucano -más conocido como mureina-, uno de los principales constituyentes de la pared celular, formando una gruesa capa en los Gram+, mientras que tienen una delgada capa en los Gram-.

Son muchas las especies de bacterias Gram- que causan enfermedades, teniendo la membrana externa una gran parte de esa responsabilidad patogénica del microorganismo. La membrana exterior está compuesta por un complejo lipopolisacárido que actúan como endotoxinas, y si esta entra en el sistema circulatorio provoca una reacción tóxica en el animal infectado. Las endotoxinas son componentes estructurales exclusivamente de las bacterias Gram-.

La membrana externa de las bacterias Gram- ejerce una notable influencia en la resistencia frente a varios antibióticos, sobretodo a los que actúan sobre la pared de peptidoglicanos, que es el punto débil de las bacteria Gram+. Hay que pensar el antibiótico no induce resistencia, solamente selecciona en una interferencia clara de la humanidad en el proceso de selección natural. La pared bacteriana de las bacterias Gram+ ejercen un efecto protector o de resistencia contra numerosos antibióticos que tienen que atravesar esta estructura para llegar al interior de la bacteria y ejercer su efecto antibacteriano, sin embargo el mantenimiento de esta estructura se convierte en el punto de ataque de varios antibióticos afectando fácilmente en la viabilidad de estas bacterias, creando una susceptibilidad diferente a los antibióticos entre las bacterias Gram+ y gram-.

Otro efecto importante que ejerce la pared en las bacterias Gram+ es la dificultad de transmisión de resistencias entre bacterias a través de plásmidos, muy frecuente en bacterias Gram-, sin embargo, por contra la pared bacteriana de los Gram+ se encuentra inmediatamente accesible y constituye un blanco ideal para los antibióticos. Esto no ocurre en bacterias Gram-, donde la pared es mucho menor y se encuentra entre dos membranas que dificultan su acceso a los antibióticos.

Las exotoxinas son toxinas secretadas por cualquier microorganismo, ya sea Gram+ o Gram-, aunque tradicionalmente se asociaban de forma exclusiva a organismos Gram+ antiguamente. En general son muy potentes y producen un gran daño al hospedador.

Ejemplos de antibióticos eficaces contra Gram+:

• Penicilinas, Amoxicilinas, Ampicilinas, Cefalosporinas.
• Bacitracina
• Enrofloxacina
• Sulfamidas
• Tetraciclinas
• Tilosina

Ejemplos de antibióticos eficaces contra Gram-:

• Neomicina, Gentamicina, Estreptomicina.
• Enrofloxacina
• Sulfamidas
• Tetraciclinas
• Colistina

Técnica de tinción Gram. Metodología.

• Recoger muestras.
• Extender la muestra.
• Dejar secar a temperatura ambiente.
• Fijar la muestra con metanol.
• Agregar azul violeta (violeta de genciana o cristal violeta).
• Enjuagar con agua.
• Agregar lugol y esperar 1 minuto.
• Enjuagar con agua.
• Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos.
• Enjuagar con agua.
• Tinción de contraste agregando Safranina o Fucsina y esperar 2 minutos.
• Enjuagar con agua.

Bacterias Gram+

• Bacillus
• Listeria
• Staphylococcus
• Streptococcus
• Enterococcus
• Clostridium
• Mycoplasmas (se tiñen como Gram-)
• Mycobacterias (se tiñen como Gram-)

Bacterias Gram-

• Haemophilus
• Klebsiella
• Legionella
• Pseudomonas
• Escherichia
• Proteus
• Enterobacter
• Salmonella
• Pasteurella
• Bordetella
• Riemerella